식품의약품안전청고시 제2006-65호

식품첨가물의기준및규격중개정

2006. 12. 27

식품의약품안전청

식품첨가물의기준및규격중개정

1. 개정이유

다양한 식품의 개발, 국제기준과의 조화 및 안전성을 확보하기 위하여 식품첨가물의기준및규격을 신설 및 개정하려는 것임.

2. 주요내용

가. 식품첨가물공전 제 4. 품목별 규격 및 기준 나. 천연첨가물 중 198.폴리감마글루탐산, 199.알파갈락토시다아제, 200.베타글리코시다아제 및 201.글루타미나아제를 신설함

나. 식품첨가물공전 제 4. 품목별 규격 및 기준 가. 화학적합성품 중 165.염기성알루미늄탄산나트륨을 지정취소함

다. 식품첨가물공전 제 4. 품목별 규격 및 기준 가. 화학적합성품 중 393.아세설팜칼륨, 396.수크랄로스의 사용기준을 개정함

라. 식품첨가물공전 제 4. 품목별 규격 및 기준 나. 천연첨가물 중 75.탈크, 186.미리스트산, 187.올레인산, 188.카프릭산의 성분규격을 개정함.

3. 참고사항

가. 관계법령 : 식품위생법 제7조 제1항

나. 규제심사 : 강화 규제사항 있음

※ 규제심사결과, 염기성알루미늄탄산나트륨의 지정취소는 필요성이 인정됨을 규제개혁위원회에서 승인함

다. 예   산 : 별도조치 필요 없음

라. 기   타 : 신․구조문 대비표 별첨

식품의약품안전청고시 제2006-65호

식품위생법 제7조 제1항의 규정에 의한 식품첨가물의기준및규격(식품의약품안전청고시 제2006-31호, 2006. 7. 28)을 다음과 같이 개정 고시합니다.

2006년 12월 27일

식품의약품안전청장

식품첨가물의기준및규격중개정

식품첨가물의기준및규격 중 다음과 같이 개정한다.

제 4. 가. 165. 염기성알루미늄탄산나트륨을 삭제한다.

제 4. 가. 393. 아세설팜칼륨의 사용기준 중 “발효유류”를 “발효유류, 조제커피”로 한다.

제 4. 가. 396. 수크랄로스의 사용기준 중 “발효유류”를 “발효유류, 조제커피”로 한다.

제 4. 나. 75. 탈크의 순도시험 (1)물가용물 및 액성 중 “이 액의 pH는 6.0～8.0이다.”를 “이 액의 pH는 7.5～9.5이다.”로 한다.

제 4. 나. 186. 미리스트산의 순도시험 (6)불검화물 중 “그 양은 1%이어야 한다.”를 “그 양은 1.0%이하이어야 한다.”로 한다.

제 4. 나. 187. 올레인산의 순도시험 (6)불검화물 중 “그 양은 2.0%이어야 한다.”를 “그 양은 2.0%이하이어야 한다.”로 한다.

제 4. 나. 188. 카프릭산의 순도시험 (6)불검화물 중 “그 양은 0.2%이어야 한다.”를 “그 양은 0.2%이하이어야 한다.”로 한다.

제 4. 나. 197 다음에 198 내지 201을 다음과 같이 신설한다.

198. 폴리감마글루탐산

Poly-γ-glutamic acid

정  의 이 품목은 고초균(Bacillus subtilis) 및 고초균의 일종인 Bacillus subtilis chungkookjang을 배양한 다음 배양여액을 막 분리 및 정제하여 얻어지는 물질로서 그 성분은 폴리감마글루탐산이다.

폴리감마글루탐산의 성분규격

함    량 이 품목은 건조한 다음 정량할 때, 폴리감마글루탐산으로서 95.0%이상을 함유한다.

성    상 이 품목은 흡습성이 강한 백색의 분말로서 냄새와 맛이 없다.

확인시험 (1) 이 품목 0.1g을 취하여 박층크로마토그라피시험을 할 때, L-글루탐산과 동일한 위치에 적색의 반점이 확인되어야 한다. 시험용액은 이 품목 0.1g을 취하여 물 9.5ml에 용해한 다음 이 액에 0.5ml의 6N 염산을 넣고 110°, 24시간 가수분해하여 시험용액으로 한다. 필요하면 여과하여 그 여과액을 사용한다. 조제된 시험용액을 다음의 전개조건하에서 전개한다.

박층크로마토그라피 조건

전개용매 : n-부틸알콜 : 빙초산 : 물 (2:1:1)

박 층 판 : 실리카겔

전개거리 : 10～15cm

발색시약 : 닌히드린 0.2g을 불포화 n-부틸알콜에 녹여 100ml로 한다.

(2) 이 품목 1g을 취하여 적외부흡수스펙트럼측정법 중의 브롬칼륨정제법에 의해 측정할 때, 카르복실기(1,735cm-1), 아민기(1,554cm-1) 및 아민기와 연결된 카르복실기(1,650cm-1)가 확인되어야 한다.

순도시험 (1) 비 소 : 이 품목 0.5g을 백금제, 석영제 또는 자제도가니에 취하여 질산마그네슘의 에틸알콜용액(1→50) 10ml를 넣고 에틸알콜에 점화하여 연소시킨 다음 서서히 가열하여 450～550°로 회화한다. 만일 탄화물이 존재하면 소량의 질산으로 적신 다음 다시 강열하고 450～550°로 회화한다. 식힌 다음 잔류물에 염산 3ml를 가하여 수욕상에서 가온하여 녹인 것을 시험용액으로 하여 식품첨가물공전 일반시험법 중 비소시험을 할 때, 이에 적합하여야 한다(4ppm 이하).

(2) 중금속 : 이 품목 1g을 석영제 또는 자제 도가니에 넣고 조용히 약하게 가열하여 탄화시킨다. 식힌 다음 질산 2ml 및 황산 5방울을 가하여 흰 연기가 발생하지 않을 때까지 가열한 후 450～550°에서 회화가 될 때까지 강열한다. 식힌 다음 염산 2ml를 가하여 수욕상에서 증발건고하고 잔류물에 염산 3방울을 가하여 주고 열탕 10ml를 가하여 2분간 가온하고 식힌 후 페놀프탈레인 시액 1방울을 가하고 암모니아시액을 액이 엷은 홍색이 될 때까지 가해 주고 나서 물을 사용하여 네슬러관에 옮겨주고 다시 희석한 초산(1→20) 2ml 및 물을 가하여 50ml로 한 것을 시험용액으로 하여 식품첨가물공전 일반시험법 중 중금속시험을 할 때, 그 양은 20ppm 이하이어야 한다. 다만, 표준색은 시료와 재질이 같은 도가니에 질산 2ml, 황산 5방울 및 염산 2ml를 넣고 가열하고 증발건조하고 잔류물에 염산 3방울을 가하여 이하 시험용액의 조제와 같이 처리하여 네슬러관에 옮겨주고 이에 납표준액 2ml, 희석한 초산(1→20) 2ml 및 물을 가하여 50ml로 한 것을 사용한다.

건조감량 이 품목 약 3g을 정밀히 달아 105°에서 3시간 건조할 때, 그 감량은 4% 이하이어야 한다.

강열잔류물 이 품목 약 1g을 정밀히 달아 강열잔류물시험을 할 때, 그 양은 1.0% 이하이어야 한다.

함    량  이 품목을 건조한 다음 약 100mg을 정밀히 달아 물 10ml에 녹인 액을 A액으로 하고 이 액 0.5ml를 취하여 6N 염산 10ml를 가하여 110°에서, 24시간 가수분해하여 시험용액으로 한다. 시험용액 일정량을 취하여 아래의 조작조건에 따라 아미노산 분석기를 이용하여 글루탐산 함량을 구한다. 별도로, 산으로 가수분해 하지 않은 A액 일정량을 취하여 아미노산분석기를 이용하여 유리 글루탐산 함량(%)을 구한 다음 계산식에 따라 폴리글루탐산 함량(%)을 구한다.

유리 글루탐산 함량(%) = 글루탐산량 / 검체채취량 × 100

폴리글루탐산함량(%) =	글루탐산량(g)	×	0.88	×	100	-	유리글루탐산의 함량
	검체채취량(g)

0.88 =	129(폴리글루탐산중의 글루탐산 잔기의 분자량)
	147(글루탐산 분자량)

아미노산분석기의 조작조건

칼럼 : HR Na column(4.6mm × 200.mm) 또는 이와 동등한 것

칼럼온도 : 78℃

검출기 및 파장 : 흡광검출기(570nm)

이동상 및 유량

- 완충액 : 구연산리튬완충액(Lithium citrate buffer, pH .2.8)을 20ml/h의 유속으로 흘려줌

- 반응액 : 닌히드린(ninhydrin)시액을 25ml/h의 유속으로 흘려줌

- 반응기 온도 : 135℃

- 검체주입량 : 40ul

199. 알파갈락토시다아제

α-Galactosidase

정    의 이 품목은 Aspergillus niger의 배양물에서 얻어진 효소이다. 다만, 역가조정, 품질보존 등을 위하여 희석제, 안정제 등을 첨가할 수 있다.

알파갈락토시다아제의 성분규격

함    량 이 품목은 정량할 때, 알파갈락토시다아제로서 표시역가의 90～130%를 함유한다.

성    상 이 품목은 백～엷은 황색의 분말이다.

순도시험 (1) 비 소 : 이 품목 0.25g을 백금제, 석영제 또는 자제도가니에 취하여 질산마그네슘의 에틸알콜용액(1→50) 10ml를 넣고 에틸알콜에 점화하여 연소시킨 다음 서서히 가열하여 450～550°로 회화한다. 만일 탄화물이 존재하면 소량의 질산으로 적신 다음 다시 강열하고 450～550°로 회화한다. 식힌 다음 잔류물에 염산 3ml를 가하여 수욕상에서 가온하여 녹인 것을 시험용액으로 하여 식품첨가물공전 일반시험법 중 비소시험을 할 때, 이에 적합하여야 한다(4ppm 이하).

(2) 중금속 : 이 품목 0.5g을 석영제 또는 자제 도가니에 넣고 조용히 약하게 가열하여 탄화시킨다. 식힌 다음 질산 2ml 및 황산 5방울을 가하여 흰 연기가 발생하지 않을 때까지 가열한 후 450～550°에서 회화가 될 때까지 강열한다. 식힌 다음 염산 2ml를 가하여 수욕상에서 증발건고하고 잔류물에 염산 3방울을 가하여 주고 열탕 10ml를 가하여 2분간 가온하고 식힌 후 페놀프탈레인 시액 1방울을 가하고 암모니아시액을 액이 엷은 홍색이 될 때 까지 가해 주고 나서 물을 사용하여 네슬러관에 옮겨주고 다시 희석한 초산(1→20) 2ml 및 물을 가하여 50ml로 한 것을 시험용액으로 하여 식품첨가물공전 일반시험법 중 중금속시험을 할 때, 그 양은 40ppm 이하이어야 한다. 다만, 표준색은 시료와 재질이 같은 도가니에 질산 2ml, 황산 5방울 및 염산 2ml를 넣고 가열하여 증발건조하고 잔류물에 염산 3방울을 가하여 이하 시험용액의 조제와 같이 처리하여 네슬러관에 옮겨주고 이에 납표준액 2ml, 희석한 초산(1→20) 2ml 및 물을 가하여 50ml로 한 것을 사용한다.

(3) 납 : 이 품목 0.8g을 취하여 조용히 가열하여 탄화시킨 다음 500°를 넘지 않는 온도에서 회화하고 묽은 질산 20ml를 주의하여 가하고 5분간 조용히 끓인 다음 필요하면 식히고 여과한다. 잔류물은 물로 씻고 씻은 액은 여액과 합치고 물을 가하여 50ml로 한 것을 시험용액으로 하여 식품첨가물공전 일반시험법 중 납시험을 할 때, 그 양은 10ppm 이하이어야 한다.

(4) 대장균군 : 이 품목은 식품공전, 일반시험법의 미생물시험법중 대장균군에 따라 시험할 때, 제품 1g당 30 이하이어야 한다.

(5) 살모넬라 : 이 품목은 식품공전, 일반시험법의 미생물시험법중 살모넬라균시험법에 따라 시험할 때, 음성(-)이어야 한다.

정량법(역가)

적용 및 원리 : 본 시험 방법은 Aspergillus niger에서 얻어진 효소제인 알파갈락토시다아제의 역가를 측정하는 방법이다. 역가시험은 온도 37°, pH 5.5에서 p-nitrophenyl-α-D-    galactopyranoside 기질의 15분간의 가수분해에 근거를 두고 있다.

효소시험용액 : 검체를 물에 녹여 최종 희석액 1ml가 0.001～0.003 galactosidase unit를 함유하도록 시험용액을 조제한다.

시험조작: 20×150mm 마개가 있는 시험관 몇 개를 일조로 하여 기질용액 2.0ml씩을 취하여 37±0.2°의 수욕조에서 15분 이상 유지하여 온도를 평형시킨다. 기질용액과 동일한 조건에서 효소시험용액 1.0ml씩을 정확히 취하여 가하고 흔들어 혼합한다. 정확히 15분 후 붕산나트륨완충액 5.0ml를 각 시험관에 가하고 흔들어 혼합한 후 물을 대조액으로 하여 405nm에서 흡광도(As)를 측정한다. 따로 효소공시험으로 효소시험용액 1ml씩을 차례로 취하여 붕산나트륨완충액 5.0ml를 가하고 흔들어 혼합한 다음 기질용액 2.0ml를 각 시험관에 가하여 혼합한 다음 효소시험용액과 동일하게 조작하여 파장 405nm에서 흡광도(AB)를 측정한다. 다음의 계산식에 따라 효소제의 역가를 구한다.

알파갈락토시다아제 역가(Gal U/g) =	(AS–AB) × F
	ε × T × M

AS : 시험용액의 흡광도

AB : 대조액 흡광도

F : 시험용액의 희석배수

T : 반응 시간(min)

M : 시험용액 1 ml에 함유된 검체의 량(g)

ε : 표준 4-니트로페놀용액에 따라 측정된 흡광계수

역가의 정의: 1 α-galactosidase unit(GalU)는 상기시험 조건하에서 분당 1μ㏖의 p-니트로페놀을 유리시키는 효소의 양이다.

시   액

초산염완충액(pH 5.5)

A액 : 11.55ml의 빙초산을 물에 녹여 1,000ml로 한다.

B액 : 초산나트륨 16.4g을 물에 녹여 1,000ml로 한다.

A액 7.5ml와 B액 42.5ml를 혼합하고 A액 또는 B액을 사용하여 pH 5.5로 조절하고 물을 가하여 전량을 1,000ml로 한다.

기질용액 : p-니트로페닐-알파-D-갈락토피라노시드(p-nitrophenyl-α-D-galactopyranoside) 0.0383g을 초산염완충액에 혼합하고 희석시켜 100ml로 한다.

붕산나트륨완충액 : 붕산나트륨 47.63g을 미지근한 물에 용해시키고 실온으로 식힌 다음 4N수산화나트륨 20ml를 가한다. pH농도를 4N 수산화나트륨으로 9.7까지 조절한 후 희석시켜 2,000ml로 한다.

4-니트로페놀표준원액 : 미리 건조시킨 4-니트로페놀 68.83mg을 정밀히 달아 물에 녹여 1,000ml로 한다. 이 용액 1ml에는 0.5μ㏖ 니트로페놀을 함유한다.

표준 4-니트로페놀용액 : 세 개의 시험관에 4-nitrophenol 표준원액을 각각 4ml, 8ml, 및  16ml를 취하여 물을 가하여 50ml로 정용한다. 이들 희석액은 1ml당 4-nitrophenol이 각각 0.04, 0.08 및 0.16μ㏖을 함유한다. 시험관 5개를 일조로 하여 기질용액 2.0ml씩을 취하여 각각 다섯 개의 시험관에 가한 다음 여기에 표준 4-nitrophenol용액 1ml씩을 네 개의 시험관에 차례로 가하고, 다섯째 시험관에는 표준원액 대신 물 1.0ml를 가한다. 다시 각각의 시험관에 붕산나트륨완충액 각각 5.0ml씩을 가한 뒤 흔들어 혼합한 다음 이들 용액에 대해 물을 대조액으로 하여 액층 1cm, 파장 405nm에서 각각의 흡광도를 측정하고 4-nitrophenol μ㏖수에 대한 검량선을 작성한다. 각 희석액의 흡광도를 4-니트로페놀 농도(μ㏖/ml)로 나누어 표준 4-니트로페놀용액의 평균 흡광계수(ε)를 구한다.

ε = AN/C

AN : 4-nitrophenol 표준용액의 흡광도

C : 4-nitrophenol의 농도(μ㏖/ml)

흡광계수 값은 18.3 근사치가 얻어져야 한다.

200. 베타글리코시다아제

β-Glycosidase

정    의 이 품목은 Penicillium multicolor의 배양물에서 얻어진 효소이다. 다만, 역가조정, 품질보존 등을 위하여 희석제, 안정제 등을 첨가할 수 있다.

베타글리코시다아제의 성분규격

함    량 이 품목은 정량할 때, 베타글리코시다아제로서 표시역가의 90～130%를 함유한다.

성    상 이 품목은 백～엷은 황색의 분말이다.

순도시험 (1) 비 소 : 이 품목 0.25g을 백금제, 석영제 또는 자제도가니에 취하여 질산마그네슘의 에틸알콜용액(1→50) 10ml를 넣고 에틸알콜에 점화하여 연소시킨 다음 서서히 가열하여 450～550°로 회화한다. 만일 탄화물이 존재하면 소량의 질산으로 적신 다음 다시 강열하고 450～550°로 회화한다. 식힌 다음 잔류물에 염산 3ml를 가하여 수욕상에서 가온하여 녹인 것을 시험용액으로 하여 식품첨가물공전 일반시험법 중 비소시험을 할 때, 이에 적합하여야 한다(4ppm 이하).

(2) 중금속 : 이 품목 0.5g을 석영제 또는 자제 도가니에 넣고 조용히 약하게 가열하여 탄화시킨다. 식힌 다음 질산 2ml 및 황산 5방울을 가하여 흰 연기가 발생하지 않을 때까지 가열한 후 450～550°에서 회화가 될 때까지 강열한다. 식힌 다음 염산 2ml를 가하여 수욕상에서 증발건고하고 잔류물에 염산 3방울을 가하여 주고 열탕 10ml를 가하여 2분간 가온하고 식힌 후 페놀프탈레인시액 1방울을 가하고 암모니아시액을 액이 엷은 홍색이 될 때까지 가해 주고 나서 물을 사용하여 네슬러관에 옮겨주고 다시 희석한 초산(1→20) 2ml 및 물을 가하여 50ml로 한 것을 시험용액으로 하여 식품첨가물공전 일반시험법 중 중금속시험을 할 때, 그 양은 40ppm 이하이어야 한다. 다만, 표준색은 시료와 재질이 같은 도가니에 질산 2ml, 황산 5방울 및 염산 2ml를 넣고 가열하고 증발건조하고 잔류물에 염산 3방울을 가하여 이하 시험용액의 조제와 같이 처리하여 네슬러관에 옮겨주고 이에 납표준액 2ml, 희석한 초산(1→20) 2ml 및 물을 가하여 50ml로 한 것을 사용한다.

(3) 납 : 이 품목 0.8g을 취하여 조용히 가열하여 탄화시킨 다음 500°를 넘지 않는 온도에서 회화하고 묽은 질산 20ml를 주의하여 가하고 5분간 조용히 끓인 다음 필요하면 식히고 여과한다. 잔류물은 물로 씻고 씻은 액은 여액과 합치고 물을 가하여 50ml로 한 것을 시험용액으로 하여 식품첨가물공전 일반시험법 중 납시험을 할 때, 그 양은 10ppm 이하이어야 한다.

(4) 대장균군 : 이 품목은 식품공전, 일반시험법의 미생물시험법 중 대장균군에 따라 시험할 때, 제품 1g당 30 이하이어야 한다.

(5) 살모넬라 : 이 품목은 식품공전, 일반시험법의 미생물시험법 중 살모넬라균시험법에 따라 시험할 때, 음성(-)이어야 한다.

정량법(역가)

적용 및 원리 : 본 시험 방법은 Penicillium multicolor에서 얻어진 효소제의 β-글리코시다아제의 역가를 측정하는 방법이다. 역가시험은 pH 5.5, 온도 40°에서 4-Nitrophenyl-primeveroside 기질의 10분간 가수분해에 근거를 두고 있다.

시험용액조제 : 검체를 20mM의 초산완충액(pH 5.5)에 녹여 다음의 시험방법에 따라 시험할 때, 흡광도가 0.3～0.7의 범위가 되도록 시험용액을 조제한다.

시험조작 : 기질용액 2ml를 정확히 취하여 20×150mm 시험관(효소시험용)에 넣은 다음 40° 수욕조에 넣고 5분간 정치시킨다. 여기에 시험용액 0.45ml를 가하여 흔들어 섞은 다음 다시 40° 수욕조에서 10분간 항온시킨다. 여기에 0.5M 탄산나트륨용액 2.5ml를 가한다. 별도로, 효소공시험용 시험관에는 기질용액 2ml를 가한 다음 40°의 수욕조에서 5분간 정치시킨다. 여기에 0.5M 탄산나트륨용액 2.5ml를 가하고 적당한 마개를 하여 수회 거꾸로 하여 잘 혼합한 다음 시험용액 0.45ml를 가하여 흔들어 섞는 다음 다시 40°의 수욕조에서 10분간 항온시킨다. 효소공시험용을 대조액으로 하여 액층 1cm, 파장 412nm에서 흡광도를 측정한다.

다음 계산식에 따라 효소제의 역가를 구한다.

베타글리코시다아제 역가(U/g)=	(SA-BA) × V	×	1
	f × 10		w

SA : 효소시험용액의 흡광도

BA : 효소공시험용액의 흡광도

V : 최종반응액의 양(ml)

f : 표준 p-니트로페놀용액에 따라 측정된 흡광계수

10 : 반응시간(분)

w : 최종반응액에 함유된 검체의 양(g)

역가의 정의 : 1 β-Glycosidase unit는 상기 시험조건하에서 1분간에 1μmol의 p-니트로페놀을 유리시키는 효소의 양이다.

시    액

20mM 초산나트륨용액 : 무수초산나트륨 1.6g을 물에 녹여 1,000ml로 한다.

20mM 초산용액 : 초산 1.2g을 물에 녹여 1,000ml로 한다.

20mM 초산완충액(pH 5.5) : 20mM 초산나트륨용액을 계속 저으면서 20mM 초산용액을 가하여 pH 5.5로 조절한다.

2mM 기질용액 : 4-Nitrophenyl-primeveroside (MW=433.4) 43.34mg을 20mM 초산완충액에 용해하여 50ml로 한다.

0.5M 탄산나트륨용액 : 탄산나트륨 5.3g을 용해하여 100ml로 한다.

표준 p-니트로페놀용액 : 미리 건조시킨 4-Nitrophenol 139.0mg을 정밀히 달아 20mM 초산완충액에 녹여 100ml로 한다. 이 용액 1ml에는 100μmol 니트로페놀을 함유한다. 이 용액을 사용하여 1ml당 40, 80, 120, 160, 200μmol을 함유하도록 20mM 초산완충액으로 희석한다. 이들 5개의 시험관에 각각의 농도의 4-Nitrophenol 용액 8ml를 넣고 40°에서 5분간 방치한 다음 20mM 초산완충액 1.8ml를 첨가한 후 40°에서 10분간 정확하게 방치하고 0.5M 탄산나트륨용액 10ml를 첨가하여 잘 혼합한 후 물을 대조액으로 하여 액층 1cm, 파장 412nm에서 흡광도를 각각 측정하고 p-니트로페놀 μmol수에 대한 검량선을 작성한다. 검량선은 0점을 통과하는 일직선이어야 하며, 각 희석액의 ΔOD(효소시험용의 흡광도-효소공시험용의 흡광도)를 p-니트로페놀 μmol수/ml로 나누어 희석액에 대한 평균 흡광계수(f)를 구한다.

201. 글루타미나아제

Glutaminase

정    의 이 품목은 Bacillus subtilis, Bacillus amyloliquefaciens, Aspergillus속 및 Candida속의 배양물에서 얻어진 효소이다. 다만, 역가조정, 품질보존 등을 위하여 희석제, 안정제 등을 첨가할 수 있다.

글루타미나아제의 성분규격

함    량 이 품목은 정량할 때, 글루타미나아제로서 표시역가의 90～130%를 함유한다.

성    상 이 품목은 백～엷은 황갈색의 분말이다.

순도시험 (1) 비 소 : 이 품목 0.25g을 백금제, 석영제 또는 자제도가니에 취하여 질산마그네슘의 에틸알콜용액(1→50) 10ml를 넣고 에틸알콜에 점화하여 연소시킨 다음 서서히 가열하여 450～550°로 회화한다. 만일 탄화물이 존재하면 소량의 질산으로 적신 다음 다시 강열하고 450～550°로 회화한다. 식힌 다음 잔류물에 염산 3ml를 가하여 수욕상에서 가온하여 녹인 것을 시험용액으로 하여 식품첨가물공전 일반시험법 중 비소시험을 할 때, 이에 적합하여야 한다(4ppm이하).

(2) 중금속 : 이 품목 0.5g을 석영제 또는 자제 도가니에 넣고 조용히 약하게 가열하여 탄화시킨다. 식힌 다음 질산 2ml 및 황산 5방울을 가하여 흰 연기가 발생하지 않을 때까지 가열한 후 450～550°에서 회화가 될 때까지 강열한다. 식힌 다음 염산 2ml를 가하여 수욕상에서 증발건고하고 잔류물에 염산 3방울을 가하여 주고 열탕 10ml를 가하여 2분간 가온하고 식힌 후 페놀프탈레인 시액 1방울을 가하고 암모니아시액을 액이 엷은 홍색이 될 때까지 가해 주고 나서 물을 사용하여 네슬러관에 옮겨주고 다시 희석한 초산(1→20) 2ml 및 물을 가하여 50ml로 한 것을 시험용액으로 하여 식품첨가물공전 일반시험법 중 중금속시험을 할 때, 그 양은 40ppm 이하이어야 한다. 다만, 표준색은 시료와 재질이 같은 도가니에 질산 2ml, 황산 5방울 및 염산 2ml를 넣고 가열하여 증발건조하고 잔류물에 염산 3방울을 가하여 이하 시험용액의 조제와 같이 처리하여 네슬러관에 옮겨주고 이에 납표준액 2ml, 희석한 초산(1→20) 2ml 및 물을 가하여 50ml로 한 것을 사용한다.

(3) 납 : 이 품목 0.8g을 취하여 조용히 가열하여 탄화시킨 다음 500°를 넘지 않는 온도에서 회화하고 묽은 질산 20ml를 주의하여 가하고 5분간 조용히 끓인 다음 필요하면 식히고 여과한다. 잔류물은 물로 씻고 씻은 액은 여액과 합치고 물을 가하여 50ml로 한 것을 시험용액으로 하여 식품첨가물공전 일반시험법 중 납시험을 할 때, 그 양은 10ppm 이하이어야 한다.

(4) 대장균군 : 이 품목은 식품공전, 일반시험법의 미생물시험법 중 대장균군에 따라 시험할 때, 제품 1g당 30 이하이어야 한다.

(5) 살모넬라 : 이 품목은 식품공전, 일반시험법의 미생물시험법 중 살모넬라균시험법에 따라 시험할 때, 음성(-)이어야 한다.

정량법(역가)

적용 및 원리 : 본 시험 방법은 Bacillus subtilis, Bacillus amyloliquefaciens, Aspergillus속 및 Candida 속에서 얻어진 효소제의 글루타미나아제 역가를 측정하는 방법이다. 역가시험은 pH 6.0, 온도 37°에서 L-γ-glutamyl-p-nitroanilide를 기질로 10분간 가수분해에 근거를 두고 있다. 생성된 p-nitroaniline을 흡광도측정법으로 측정한다.

시험용액조제 : 검체를 희석용액에 녹여 다음의 시험방법에 따라 시험할 때 흡광도차(As-Ab)가 0.3～1.0의 범위가 되도록 시험용액을 조제한다.

표준곡선 : p-니트로아닐린 0.0414g을 초산 6g에 용해하고 1M 초산․초산나트륨완충액(pH 6.0) 10ml를 가한 다음 물을 가하여 100ml로 한다. 이 용액은 1ml당 3 μmol의 p-니트로아닐린을 함유한다. 이 용액을 1.1M 초산․초산나트륨완충액을 사용하여 1ml당 0.025，0.05，0.075，0.1，0.125μmol을 함유하도록 희석한다. 5개의 용액을 1.1M 초산․초산나트륨완충액을 대조액으로 하여 액층 1cm, 파장 410nm 에서 흡광도를 측정한다. 흡광도의 차 1.000에 대한 p-니트로아닐린의 농도(Ｆ, μmol/ml)를 구한다.

시험조작 : 20×150mm 시험관을 효소시험용 및 효소공시험용으로 하여 각각에 기질용액 4ml씩을 가한다. 시험관을 37±0.2°의 수욕조에서 5분간 항온시킨다. 효소시험용에는 시험용액 0.5ml를 정확히 취하여 재빨리 가하고 흔들어 수욕조에 다시 방치한다. 정확히 10분후에 10M 초산 0.5ml를 가하여 효소의 작용을 정지시킨다. 효소공시험용 시험관에는 10M 초산 0.5ml를 가하여 흔들어 준 다음 시험용액 0.5ml의 순으로 가하여 진탕혼합한 다음 수욕조에서 10분간 가온한다. 효소공시험을 대조액으로 하여 액층 1cm, 파장 410nm에서 효소시험용액(As) 및 효소공시험용액(Ab)의 흡광도를 측정한다.

다음 계산식에 따라 효소제의 역가를 측정한다.

글루타미나아제 역가(GSU/g) = (Ａs－Ａb）× Ｆ × Ｄ

Ｆ： 표준곡선에서 얻어진 흡광도 차가 １.000일 때의 p-nitroaniline 농도（μmol/ｍl）

Ｄ： 검체의 희석배수

역가의 정의 : 1 glutaminase unit(GSU)는 상기 시험조건하에서 1분간에 1μmol의 ｐ-니트로아닐린을 유리시키는 효소의 양이다.

시    액

기질용액 : L-γ-glutamyl-p-nitroanilide․HO 0.0285g을 달아 2N 염산용액 0.2ml에 용해하고 물 약 70ml를 가한다. 이 용액에 1M 초산․초산나트륨완충액(pH 6.0) 10ml에 2N 수산화나트륨용액 0.2ml를 가한 액을 넣은 다음 물을 가하여 100ml로 한다. 이 용액은 사용시 조제한다.

2N 염산 : 염산 16.7ml에 물을 가하여 용해한 다음 100ml로 한다.

2N 수산화나트륨 용액 : 수산화나트륨 8g에 물을 가하여 녹이고 100ml로 한다.

1M 초산 : 초산 60g에 물을 가하여 1,000ml로 한다.

1M 초산나트륨 용액 : 초산나트륨(3수화물) 136g을 물에 용해한 다음 전량을 1,000ml로 한다.

1M 초산․초산나트륨 완충액 (pH 6.0）: 1M 초산나트륨용액에 1M 초산을 가하여 pH 6.0으로 조정한다.

1.1M 초산․초산나트륨완충액 : 초산 60g 및 1M 초산․초산나트륨완충액(pH 6.0) 100ml에 물을 가하여 1,000ml로 한다.

10％ TRITON Ｘ-100 용액 : TRITON Ｘ-100 10g에 물 약 70ml를 가하여 가온시켜 용해한 다음 냉각 후 물을 가하여 100ml로 한다.

희석용액 : 염화나트륨(NaCl) 5.84g을 물로 용해한 다음 1M 초산․초산나트륨완충액(pH 6.0）100ml 및 10％ TRITON Ｘ-100 1ml를 넣은 다음 물을 가하여 1,000ml로 한다.

부  칙

①(시행일) 이 고시는 고시한 날부터 시행한다.

②(경과조치) 이 고시 시행당시 종전의 고시에 의하여 접수된 민원서류는 종전의 고시에 의한다.

신․구조문대비표

현 행	개 정 (안)
제4. 품목별 규격 및 기준 가. 화학적합성품 165. 염기성알루미늄탄산나트륨 Basic Sodium Aluminium Carbonate 디히드록시알루미늄소듐카아보네이트 NaAl(OH)2CO3 분자량 144.0 함 량 이 품목은 110°에서 3시간 건조한 다음 정량 할 때, 염기성알루미늄탄산나트륨(NaAlH2CO5) 97.0% 이상을 함유한다. 성 상 이 품목은 백색의 결정성분말 또는 과립으 로서 냄새와 맛이 없다. 확인시험 (1) 이 품목 2g에 희석한 염산(1→5) 30ml를 가하면 무색의 가스를 발생하면서 녹는다. 이 가스를 수산화칼슘시액에 통하면 백색의 침전이 생긴다. (2) 위 (1)에서 얻은 용액을 탄산나트륨시액으로 침전이 생기지 아니할 정도로 중화한 액은 확인시험법중의 알루미늄염의 반응을 나타낸다. (3) 이 품목 1g을 묽은염산 15ml에 녹여 수욕상에서 증발건고하고 이에 물 10ml를 가하여 녹인 액은 확인시험법중 나트륨염의 반응을 나타낸다. (4) 이 품목을 110°에서 3시간 건조한 것을 다시 진공건조시킨 다음 적외부흡수스펙트럼측정법 (1)브롬칼륨정제법에 따라 검체농도 1%로 하여 적외부흡수스펙트럼을 측정 할 때, 다음과 같은 파수위치(±0.5%)에 흡수대를 볼 수 있고, 그 모양은 다음 그림과 비슷하다.	〈삭 제〉

현 행	개 정 (안)
순도시험 (1) 용 상 : 이 품목 1g을 희석한 염산(2→3) 10ml에 녹이고 이에 물 10ml를 가할 때, 그 탁도는 약간 미탁 이하이어야 한다. (2) 물가용물 : 이 품목 2g에 새로 끓여서 식힌 물 100ml를 가하여 저어 섞으면서 끓이고 식힌 다음 여과하여 여액 50ml를 취하여 수욕상에서 증발건고하고 잔류물을 110°에서 3시간 건조할 때, 그 양은 13mg 이하이어야 한다. (3) 비 소 : 이 품목 0.25g을 희석한 염산(1→2) 5ml에 녹인 것을 시험용액으로 하여 비소시험을 할 때, 이에 적합하여야 한다(4ppm 이하). (4) 중금속 : 이 품목 2g을 희석한 염산(1→2) 30ml에 녹여 수욕상에서 증발건고하고 잔류물은 묽은초산 4ml 및 물에 녹여 60ml로 하고 여과하여 여액 30ml를 취하여 이를 시험용액으로 하여 중금속시험을 할 때, 그 양은30ppm 이하이어야 한다. (5) 철 : 이 품목 0.1g에 물 10ml를 가하여 잘 흔들어 섞은 다음 여과하고 여액에 페로시안화칼륨시액 5방울을 가할 때, 청색을 나타내어서는 아니된다. 흡착력시험 이 품목을 110°에서 3시간 건조한 다음 그 0.1g을 공전시험관에 취하여 메틸렌블루시액 A 2ml를 가하여 5분간 잘 흔들어 섞은 다음 이를 미리 메틸렌블루시액 B 20ml를 흡인여과한 지름 20mm의 정량분석용여과지로 흡인여과할 때, 여액의 색은 메틸렌블루시액 B의 색보다 진하여서는 아니된다.

현    행

개     정 (안)

메틸렌블루시액 A : 메틸렌블루 0.12g을 물에 녹여 100ml로 한다.

메틸렌블루시액 B : 메틸렌블루시액 A 10ml에 물을 가하여 500ml로 하고 그 중 5ml에 물을 가하여 500ml로 한다.

제산능력시험  이 품목 0.2g을 달아 공전플라스크에 넣고 0.1N 염산 100ml를 가하여 흔들어 섞은 다음 이 액 50ml를 취하여 브롬페놀블루시액 3방울을 가하고 1N 수산화나트륨용액으로 적정한다. 이 품목 1g에 해당하는 0.1N 염산의 소비량은 230ml 이상이어야 한다.

건조감량  이 품목을 110°에서 3시간 건조할 때, 그 감량은 5% 이하이어야 한다.

정 량 법  이 품목을 110°에서 3시간 건조하여 약 1g을 정밀히 달아 묽은염산 30ml를 가하여 녹이고 물 50ml를 가하여 여과하고 여과지를 뜨거운 물로 씻어 액과 여액을 합하고 물을 가하여 200ml로 한다. 이에 메틸레드시액 3방울을 가하여 액이 황색을 나타낼 때까지 암모니아시액을 가하고 끓을 때까지 가열한 다음 정량용여과지로 여과하여 분리되는 침전을 뜨거운 물로 여러 번 잘 씻어 씻은 액에 질산은시액을 가하여도 혼탁되지 아니하게 되면 침전물을 건조하고 650∼700°에서 항량이 될 때까지 회화시킨 다음 무게를 달아 Al2O3의 양을 구하고 다음 식에 따라 염기성알루미늄탄산나트륨의 함량을 산출한다.

함 량(%)=	Al2O3의 양(g)	×	208	×	100
	검체의 채취량(g)		102

염기성알루미늄탄산나트륨 및 이를 함유하는 제제의 사용기준

염기성알루미늄탄산나트륨 및 이를 함유하는 제제는 식품의 제조 또는 가공상 필요불가결한 경우 이외에 식품에 사용하여서는 아니된다.

염기성알루미늄탄산나트륨 및 이를 함유하는 제제의 식품중의 잔존량은 염기성알루미늄탄산나트륨으로서 식품의 0.5% 이하이어야 한다.

현 행	개 정 (안)
393. 아세설팜칼륨 사용기준 1.～3. (생 략) 4. 음료류, 가공유류, 발효유류 : 0.50g/kg 이하(다만, 희석하여 음용하는 제품에 있어서는 희석한 것으로서) 5.～7. (생 략)	393. 아세설팜칼륨 사용기준 1.～3. (현행과 같음) 4. ----------- 발효유류, 조제커피 : ----- ----------------------------------- ------------- 5.～7. (현행과 같음)
396.수크랄로스 사용기준 1.～3. (생 략) 4. 음료류, 가공유류, 발효유류 : 0.40g/kg 이하(다만, 희석하여 음용하는 제품에 있어서는 희석한 것으로서) 5.～7. (생 략)	396.수크랄로스 사용기준 1.～3. (현행과 같음) 4. ----------- 발효유류, 조제커피 : ----- ----------------------------------- ------------- 5.～7. (현행과 같음)
제4. 품목별 규격 및 기준 나. 천연첨가물 75. 탈크 탈크의 성분규격 순도시험 (1) 물가용물 및 액성 : 이 품목 10g에 물 100ml를 가하여 증발하는 물은 보충하면서 때때로 흔들어 섞으면서 2시간 가열하고 ---------------------------------- ---------------------------------- 이 액의 pH는 6.0～8.0이다. (이하 생략)	제4. 품목별 규격 및 기준 나. 천연첨가물 75. 탈크 탈크의 성분규격 순도시험 (1) 물가용물 및 액성 : 이 품목 10g에 물 100ml를 가하여 증발하는 물은 보충하면서 때때로 흔들어 섞으면서 2시간 가열하고 ---------------------------------- ---------------------------------- 이 액의 pH는 7.5～9.5이다. (현행과 같음)
186. 미리스트산 순도시험 (6)불검화물 : 이 품목 5g을 정밀히 달아 250ml플라스크에 취하고 수산화칼륨 2g 및 알콜 40ml를 가해주고 환류냉각기를 부착한 ----------------------------------- ------------------------------------ ---, 그 양은 1%이어야 한다.	186. 미리스트산 순도시험 (6)불검화물 : 이 품목 5g을 정밀히 달아 250ml플라스크에 취하고 수산화칼륨 2g 및 알콜 40ml를 가해주고 환류냉각기를 부착한 ------------------------------------ ------------------------------------ ---, 그 양은 1.0% 이하이어야 한다.

현 행	개 정 (안)
187. 올레인산 순도시험 (6)불검화물 : 이 품목 5g을 정밀히 달아 250ml플라스크에 취하고 수산화칼륨 2g 및 알콜 40ml를 가해주고 환류냉각기를 부착한 ------------------------------------ ------------------------------------ ---, 그 양은 2.0%이어야 한다.	187. 올레인산 순도시험 (6)불검화물 : 이 품목 5g을 정밀히 달아 250ml플라스크에 취하고 수산화칼륨 2g 및 알콜 40ml를 가해주고 환류냉각기를 부착한 ------------------------------------ ------------------------------------ ---, 그 양은 2.0% 이하이어야 한다.
188. 카프릭산 순도시험 (6)불검화물 : 이 품목 5g을 정밀히 달아 250ml플라스크에 취하고 수산화칼륨 2g 및 알콜 40ml를 가해주고 환류냉각기를 부착한 ------------------------------------ ------------------------------------ ---, 그 양은 0.2%이어야 한다.	188. 카프릭산 순도시험 (6)불검화물 : 이 품목 5g을 정밀히 달아 250ml플라스크에 취하고 수산화칼륨 2g 및 알콜 40ml를 가해주고 환류냉각기를 부착한 ------------------------------------ ------------------------------------ ---, 그 양은 0.2% 이하이어야 한다.